научный сотрудник лаборатории биосинтеза иммуноглобулинов,
115533, Moscow, Nagatinskaya emb., 18, apt 90
Research Associate, Laboratory of Immunoglobulin Biosynthesis
научный сотрудник лаборатории биосинтеза иммуноглобулинов
Research Associate, Laboratory of Immunoglobulin Biosynthesis
д.б.н., профессор, заведующая лабораторией биосинтеза иммуноглобулинов
hD, MD (Biology), Professor, Head, Laboratory of Immunoglobulin Biosynthesis
Breg угнетают патологические процессы при воспалительных и аутоиммунных заболеваниях. Регуляторные функции Breg обусловлены в основном секрецией IL-10. Роль Breg в гуморальном иммунном ответе не изучалась. В данной работе было исследовано влияние IL-10 и Breg при иммунном ответе В1- и В2-клеток мыши на Т-зависимые и Т-независимые антигены в модельной системе in vitro. В качестве Т-зависимого антигена использовали водорастворимый антиген бараньих эритроцитов, Т-независимого антигена 1 типа – LPS, Т-независимых антигенов 2 типа поливинилпирролидон и α(1→3) декстран. В1- и В2-лимфоциты были выделены из клеток перитонеальной полости и селезенки мышей линии СВА соответственно. Клетки культивировались в среде RPMI 1640 с 10% ЭТС и всеми необходимыми добавками с антигенами, IL-10 и без них. Число антитело- и иммуноглобулин-образующих клеток определяли методом ELISPOT.
Под действием водорастворимого антигена бараньих эритроцитов число антитело- и иммуноглобулин-образующих клеток в культурах В1- и В2-лимфоцитов возрастало. Добавление IL-10 приводило к снижению числа антителопродуцентов в среднем на 27%. IL-10 снижал также число индуцированных LPS антитело- и иммуноглобулин-образующих клеток в культуре В2-лимфоцитов на 75%. Под действием IL-10 в культуре В1-клеток, активированных Т-независимыми антигенами 2 типа, число антителопродуцентов уменьшалось в среднем на 50%.
Для изучения функциональной активности Breg выделяли из клеток перитонеальной полости и селезенки мышей линии СВА. Количество Breg после активации В-клеток LPS, иономицином и форболовым эфиром возрастало в 20 раз (с 4 до 96%). Основным изотипом иммуноглобулинов, секретируемых Breg, являлся IgM. При чистоте Вreg 96% иммуноглобулины секретировали ~12% этих клеток. Это означает, что некоторая часть Breg одновременно синтезирует иммуноглобулины и IL-10.
Получение высокоочищенных Breg и использование трансвеллов позволило исследовать бесконтактное влияние Breg на иммунный ответ в культуре спленоцитов xid-мышей линии CBA/N. Было установлено, что как специфический, так и поликлональный ответ в культуре этих клеток на водорастворимый антиген бараньих эритроцитов Breg угнетали. Таким образом, Breg участвуют в гуморальном иммунном ответе, подавляя функциональную активность спленоцитов мышей линии CBA/N на Т-зависимый антиген. Очевидно, что сущеcтвенную роль в этом играет секретируемый Breg IL-10.
B regulatory cells (Bregs) are shown to downregulate autoimmune and inflammation processes. Their modifying effects depend on IL-10 secretion. A role of Bregs in development of humoral immune response was not investigated. Influence of Bregs and IL-10 upon in vitro response of murine B1 and B2 cells to T-dependent and T-independent antigens was studied in a model system. A water-soluble sheep erythrocyte antigen was used as a T-dependent antigen, whereas LPS was applied as a type 1 T-independent antigen, and polyvinylpirrolidone and alpha(1→3)dextran were added as type 2 T-independent antigens. В1and B2 lymphocytes were isolated from, respectively, peritoneal cavity and spleen of CBA mice. The cells were cultured in RPMI1640 medium with 10% of FCS supplemented with appropriate antigens and IL-10. The numbers of antibody- and total Ig-forming cells were determined by ELISPOT method.
The erythrocyte antigen induced an increase of antibody- and total Ig-forming cell numbers in cultured B1 and B2 cell populations. IL-10 addition caused reduction of antibody- and total Ig-forming cells by 27%. Similarly, IL-10 caused a drop in antibody- and total Ig-forming cells in LPS-stimulated B2 cell cultures by 75%, as well as 50 per cent decrease in numbers of antibody-forming cells in B-1 cell cultures when induced by the type 2 T-independent antigens.
To assess functional activity of Bregs, the cells were isolated from peritoneal cavity and spleen of CBA mice. Total yields of Bregs were 20-fold increased upon activation of B cells with LPS, ionomycin and phorbol ester (from 4% to 96%). IgM was the main immunoglobulin isotype secreted by the Bregs. 96% of activated Bregs produced IL-10. About 12% of the cells were shown to produce immunoglobulins. This finding suggests that some of Bregs synthesize both IL-10 and immunoglobulins.
To study distant effect of Bregs upon immune response, the splenocyte culture of xid CBA/N mice were tested in Transwells with enriched Bregs. It was revealed that the Bregs caused inhibition of both specific and polyclonal immune response to the water-soluble sheep erythrocyte antigen. Hence, Bregs are shown to participate in humoral immune response, probably, by suppressing functional activity of splenocytes from CBA/N mice to T-dependent antigen. IL-10 secreted by Bregs may play a sufficient role in these regulatory effects.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.